제1장 단백질 실험의 진행방법 官崎 香
1-1 기본적인 실험의 흐름 12
1-2 단백질 실험 포인트 14

제2장 단백질의 기본적인 실험조작
1. Buffer 조제법 西望 17
1-1 Buffer(완충액)의 선택 17
1-2 Buffer의 조제 예 19
1 Phophate buffer(인산 buffer) 2 Tris buffer 3 GTA buffer
2. 단백질의 안정화 西望 24
2-1 단백질의 구조 24
2-2 안정화시약 26
1 단백질을 취급함에 있어서 일반적인 주의사항 2 방부제 3 Protease inhibitor
4 다수산기성 화합물 5 SH기 보호제, 산화방지제 6 흡착 방지제 7 기타
3. 단백질 정량법 奧村宣明 30
3-1 UV법(280nm) 31
3-2 Biuret법 32
3-3 Lowry법 33
3-4 BCA법 33
3-5 Bradford법 34

제3장 단백질 추출법
1. 세포의 파괴와 분획 35
1-1 동물조직 中村正彦 37
1 원리와 기초지식 2 분획의 실제(간장의 적출과 분획) 3 세포 소기관의 분리정제
1-2 배양세포 官崎 香 47
1-3 효모(yeast) 中井正人 中井由實 56
1-4 식물 騰田祐一 61
2. 단백질의 가용화법 65
2-1 생체막성분의 분리 65
1 핵막의 분리 2 Mitochondria 막성분의 분리 3 세포막의 단리 정제
2-2 막단백질의 가용화 69
1 막단백질의 존재 양식 2 생체막 조성과 막단백질의 안정성
3 막단백질의 가용화 방법

제4장 분리정제법
1. 정제의 조립 방법 官崎 香 75
1-1 정제를 시작하기 전 75
1 활성 측정 2 정제의 목표 3 좋은 출발재료의 확보 4 단백질의 안정화
1-2 정제의 진행방법 76
2. 황산암모늄분획, 농축, 탈염조작 官崎 香 81
2-1 황산암모늄 분획 81
2-2 유기용매와 산에 의한 단백질의 침전 농축 83
1 아세톤에 의한 단백질의 침전 2 삼염화 초산(TCA)에 의한 단백질의 침전
2-3 막농축(한외여과) 86
2-4 기타 농축법 87
2-5 투석 88
3. 저압 chromatography의 기본조작 官崎 香, 越川直彦 91
3-1 연질 담체의 종류 91
3-2 필요한 장치와 기구 92
3-3 실험 조작 94
1 Column에의 담체 충진 2 Chromatography의 조작
3 Badge법에 의한 분리 4 담체의 보존
4. 중고압액체 chromatography의 기본조작
(FPLC, HPLC 등의 이용) 安光英太郞 98
4-1 System에 필요한 기계류 98
4-2 조작 101
1 전개용매의 조제와 탈기 2 Controller의 초기 설정
3 System의 MilliQ W에 의한 washing
4 Column의 system의 조립, washing과 평형화
5 용출 gradient의 program 설정방법과 그 program의 개량 방향
6 예비적 용출(추출용의 gradient program을 이용한 prerun)
7 Sample의 조제 8 Sample 주입과 용출 9 Peak의 분획과 포집
10 Column의 세척과 재평형화 11 Column을 보존 용매로 치환
12 Column의 제거 13 System의 MilliQ W에 의한 세척
5. 이온교환 chromatography 吉川大和, 官崎 香 117
5-1 이온교환 chromatography의 원리 117
5-2 실험조건 117
1 담체(gel)의 선택 2 완충액(buffer) 3 시료액
4 유속 5 용출, column의 보존
5-3 음이온 교환 HPLC의 실험예-Laminin-5(라도신)의 정제 122
5-4 연질gel 이온교환 chromatography 124
5-5 기타 125
6. Gel 여과 chromatography 吉川大和, 山中直樹, 官崎 香 126
6-1 원리와 특징 126
6-2 실험조건 127
1 담체(gel) 2 시료 3 Buffer 4 기타
6-3 Sepharose 4B를 이용한 gel 여과 chromatography-라도신
(laminin-5) 정제에의 응용 129
6-4 Superdex column을 이용한 gel 여과 HPLC 132
6-5 Gel 여과에 의한 탈염 133
7. Affinity chromatography 越川直彦, 官崎 香 135
7-1 주요한 실험조건 136
1 Ligand의 선택 2 Ligand 고정화 담체의 선택과 고정화 방법
3 흡착조건 4 용출조건
7-2 Affinity chromatography의 실제 139
1 Trypsine affinity chromatography 2 Gelatin affinity chromatography
7-3 기타 chromatography 145
1 Hydroxyapatide chromatography 2 소수(hydrophobic chromatography)
8. 역상 chromatography 中澤美紀 147
8-1 중요한 실험 조건 147
8-2 실험 조작 148

제5장 유전자 재조합 단백질의 발현과 정제
1. 대장균에 의한 융합 단백질의 발현과 정제 141
1-1 His tag 단백질의 발현과 정제 安光英太郞 和久井世紀 153
1 실험의 개요와 예비실험 2 대장균의 파괴와 단백질의 추출
3 His tag 단백질의 용해 4 His-tag 단백질의 Nickel column으로부터 용출
5 Nickel column의 재생과 보존 6 단백질 정제를 성공시키기 위한 중요 포인트
1-2 GST 융합단백질의 발현과 정제 光英太郞 173
1-3 봉입체로부터의 활성재생법 三澤 悟 178
1 실험예 1 : 조직 Plasminogen 활성인자(t-PA)의 활성 재생법
2 실험예 2 : Metalloprotease의 저해인자(TIMP)의 활성 재생법
1-4 기타 tag와 융합 단백질 安光英太郞 192
2. baculovirus·곤충 세포계에서의 재조합 단백질의 발현과 정제 川本 進 官城洋平 194
2-1 재조합 virus의 제작 196
1 homologous recombinantion을 이용하는 계
2 Transposition을 이용하는 계
2-2 재조합 단백질의 발현 정제 203
3. 동물세포에서의 유전자 재조합 단백질의 발현 谷慶喜 206
3-1 발현계의 설계 206
3-2 결 론 213
4. 무세포 단백질의 합성계 淸水義 上田卓也 214
4-1 무세포 단백질 합성계의 개요와 그 이점 214
4-2 PURESYSTEM kit를 이용한 단백질의 합성 215
5. 고차구조 해석을 위한 단백질의 조제 222
5-1 X선결정구조 해석을 위한 단백질 조제법 山下瑩樹 222
1 정제의 순도 2 완충액 3 안정성 4 검정법
5 필요한 양 6 결정화의 방법
5-2 NMR 해석을 위한 단백질 조제법 池上貴久 226
1 안정동위체 도입을 위한 단백질 발현법
2 NMR sample의 최종 조제

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